Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for detection of IgY Anti-Borrelia anserina antibodies in Gallus gallus domesticus / Ensaio de imunoadsorção enzimático (ELISA) indireto para detecção de anticorpos IgY Anti-Borreliaanserina em Gallus gallus domesticus

This study aimed to promote the standardization of an indirect, enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for the serological detection of B. anserina in Gallus gallusdomesticus. An aliquoted sera from vaccinated chicken with B. anserina antigen (GI), experimental infected chickens with B. anserina (GII) and rustic poultry rearing of G. gallus (GIII) were tested with in-house ELISA developed to detect serum antibodies against B. anserina in G. gallus domesticus. On average, the experimentally infected chickens became positive at 9 DPI a mean ± standard deviation (SD) ODI value of 163.11 ± 70.65. The highest observed Optical Density Index (ODI) was 372.54 ± 132.39, at 26 DPI, and the highest overall ODI value was 626.51. The vaccinated chickens became positive between 8 and 10 DPV, with an ODI of 245.59 at 10 DPV, with an overall maximum ODI of 543.13. A total of 108 blood samples were collected from poultry raised on rustic farms. Of the total samples collected, 58.33% (63/108) were considered positive for B. anserina. The maximum ODI found among these rustic chickens was 283.24. This stardardization provided a sensitivity and specificity of 100%.

Este estudo teve como objetivo promover a padronização de um ensaio imunoenzimático indireto (ELISA) para a detecção sorológica de Borrelia anserina em Gallus gallus domesticus. Um frango vacinado com antígeno de B. anserina (GI), frangos infectados experimentalmente com B. anserina (GII) e frangos criados de forma rústica (GIII) foram testados com ELISA indireto in house desenvolvido para a detecção sorológica contra B. anserina em G. gallus domesticus. Em média, os frangos infectados experimentalmente tornaram-se positivos aos 9º dia pós-inoculação (DPI), um valor do índice de densidade óptica (ODI) médio ± desvio padrão (SD) de 163,11 ± 70,65. O maior ODI observado foi 372,54 ± 132,39, em 26ºDPI, e o maior valor geral de ODI foi 626,51. Os frangos vacinados tornaram-se positivos entre 8º e 10° DPV, com um ODI de 245,59 a 10 DPV, com um ODI máximo geral de 543,13. Um total de 108 amostras de sangue foram coletadas de aves criadas em fazendas rústicas. Do total de amostras coletadas, 58,33% (63/108) foram consideradas positivas para B. anserina. O ODI máximo encontrado entre essas galinhas rústicas foi 283,24. Essa padronização proporcionou sensibilidade e especificidade de 100%.

Serological and molecular detection of Theileria equi in horses from Sinop, Mato Grosso state, Brazil / Detecção sorológica e molecular de Theileria equi em equinos oriundos de Sinop, Mato Grosso, Brasil

Equine piroplasmosis is the most important tick-borne disease to affect horses in Brazil. Theileria equi is one of the causative agents of equine piroplasmosis. Chronic cases are expected, in which the animals show no apparent signs of infection and remain asymptomatic but constitute a source of the infectious agent that ticks can spread. This study was conducted across 81 ranches located in the municipality of Sinop, State of Mato Grosso, Brazil. A sample calculation was performed to estimate the apparent prevalence of T. equi among horses. A total of 1,853 animals were included in the sampling analysis based on the information available from the Institute of Agricultural and Livestock Defense of Mato Grosso State. The serological analysis of 367 serum samples using an indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) to detect anti-T. equi antibodies revealed that 337 animals were positive, representing a frequency of 90.70%. The molecular analysis to amplify the EMA-1 gene showed positivity in 20 of 89 tested samples. The fragments of four samples were sequenced and analyzed to determine their similarities to sequences from other species, based on sequences deposited at GenBank. All showed 100% similarity with T. equi. Our study represents the first report of T. equi antibodies among the equids in north-central region of Mato Grosso, revealing the widespread distribution of seropositive animals.

A piroplasmose equina é a doença transmitida por carrapatos mais importante em cavalos no Brasil. Theileria equi é um dos agentes causadores da piroplasmose equina. São esperados casos crônicos, nos quais os animais não apresentam sinais aparentes de infecção e permanecem assintomáticos, mas constituem uma fonte de infecção e disseminação por carrapatos. Este estudo foi realizado em 81 fazendas localizadas no município de Sinop, Estado de Mato Grosso, Brasil. Um cálculo amostral foi realizado para estimar a prevalência aparente de T. equi entre cavalos. No total, 1.853 animais foram incluídos na análise amostral com base nas informações disponíveis no Instituto de Defesa Agropecuária do Estado de Mato Grosso. A análise sorológica de 367 amostras de soro por meio de ensaio imunoenzimático indireto (ELISA) para detecção de anticorpos anti-T. equi revelou que 337 animais eram positivos, representando uma frequência de 90,70%. A análise molecular para o gene EMA-1 mostrou positividade em 20 das 89 amostras testadas. Os fragmentos de quatro amostras foram sequenciados e analisados para determinar suas semelhanças com sequências de outras espécies, a partir das sequências depositadas no GenBank. Todos mostraram 100% de similaridade com T. equi. Nosso estudo representa o primeiro relato de anticorpos contra T. equi entre os equídeos na região centro norte de Mato Grosso, revelando a ampla distribuição de animais soropositivos.

Inquérito sorológico de brucelose em machos e fêmeas bovinas em fazendas do Estado de Mato Grosso do Sul / Serological survey of brucellosis in males and females of cattle in the State of Mato Grosso do Sul

Objetivou-se avaliar a ocorrência de animais soro reagentes à brucelose bovina em fazendas localizadas no Estado de Mato Grosso do Sul, por meio de exame sorológico utilizando o Antígeno Acidificado Tamponado (AAT) e discutir as possíveis diferenças entre as soroprevalências de fêmeas e machos. Foram avaliados, a partir do teste de triagem com Antígeno Acidificado Tamponado (AAT), 724 bovinos da raça Nelore, sendo 274 machos e 450 fêmeas, provenientes de oito propriedades com histórico de problemas reprodutivos. O teste foi procedido conforme o protocolo determinado pelo Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA). Os resultados demonstraram baixa soroprevalência da doença nos bovinos testados, sendo detectada prevalência para a doença de 1,10% nos machos e 2,88% nas fêmeas.Quando se considera o touro isoladamente nos rebanhos, pode-se perceber que a fertilidade é muito mais importante nos machos do que nas fêmeas individualmente, uma vez que os touros podem se acasalar com um número muito maior de fêmeas, seja na monta natural ou na inseminação artificial, demonstrando a importância do inquérito epidemiológico na população geral, principalmente nos machos. A maior frequência da doença foi encontrada nas fêmeas podendo estar relacionada à infecção por Brucella spp. no ambiente decorrente de parto ou aborto tornando as fêmeas transmissoras permanentes da doença.

The objective of this study was to evaluate the occurrence of seroreactive animals to bovine brucellosis in farms located in the State of Mato Grosso do Sul, by means of a serological examination using the Acidified Buffered Antigen (AAT) and to discuss the possible differences between the seroprevalence of females and males. A total of 724 Nellore cattle, 274 males and 450 females, from eight farms with a history of reproductive problems, were evaluated using the screening test with Acidified Buffered Antigen (AAT). The test was carried out according to the protocol determined by the Ministry of Agriculture, Livestock and Food Supply (MAPA).The results showed a low seroprevalence of the disease in the tested cattle, with a prevalence of 1.10% in males and 2.88% in females.When considered the bull alone in herds, it can be shown that fertility is much more important in males than in females individually, since bulls can mate with a much larger number of females, either in natural mating or in artificial insemination, demonstrating the importance of epidemiological survey in the general population, especially in males. The highest frequency of the disease was found in females and may be related to infection by Brucella spp. in the environment from childbirth or abortion making females permanent transmitters of the disease.

Inquérito sorológico de brucelose em machos e fêmeas bovinas em fazendas do Estado de Mato Grosso do Sul / Serological survey of brucellosis in males and females of cattle in the State of Mato Grosso do Sul

Objetivou-se avaliar a ocorrência de animais soro reagentes à brucelose bovina em fazendas localizadas no Estado de Mato Grosso do Sul, por meio de exame sorológico utilizando o Antígeno Acidificado Tamponado (AAT) e discutir as possíveis diferenças entre as soroprevalências de fêmeas e machos. Foram avaliados, a partir do teste de triagem com Antígeno Acidificado Tamponado (AAT), 724 bovinos da raça Nelore, sendo 274 machos e 450 fêmeas, provenientes de oito propriedades com histórico de problemas reprodutivos. O teste foi procedido conforme o protocolo determinado pelo Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA). Os resultados demonstraram baixa soroprevalência da doença nos bovinos testados, sendo detectada prevalência para a doença de 1,10% nos machos e 2,88% nas fêmeas.Quando se considera o touro isoladamente nos rebanhos, pode-se perceber que a fertilidade é muito mais importante nos machos do que nas fêmeas individualmente, uma vez que os touros podem se acasalar com um número muito maior de fêmeas, seja na monta natural ou na inseminação artificial, demonstrando a importância do inquérito epidemiológico na população geral, principalmente nos machos. A maior frequência da doença foi encontrada nas fêmeas podendo estar relacionada à infecção por Brucella spp. no ambiente decorrente de parto ou aborto tornando as fêmeas transmissoras permanentes da doença.

The objective of this study was to evaluate the occurrence of seroreactive animals to bovine brucellosis in farms located in the State of Mato Grosso do Sul, by means of a serological examination using the Acidified Buffered Antigen (AAT) and to discuss the possible differences between the seroprevalence of females and males. A total of 724 Nellore cattle, 274 males and 450 females, from eight farms with a history of reproductive problems, were evaluated using the screening test with Acidified Buffered Antigen (AAT). The test was carried out according to the protocol determined by the Ministry of Agriculture, Livestock and Food Supply (MAPA).The results showed a low seroprevalence of the disease in the tested cattle, with a prevalence of 1.10% in males and 2.88% in females.When considered the bull alone in herds, it can be shown that fertility is much more important in males than in females individually, since bulls can mate with a much larger number of females, either in natural mating or in artificial insemination, demonstrating the importance of epidemiological survey in the general population, especially in males. The highest frequency of the disease was found in females and may be related to infection by Brucella spp. in the environment from childbirth or abortion making females permanent transmitters of the disease.

True prevalence and spatial distribution of equine infectious anemia virus (EIAV) in horses from northeast region of Brazil

Equine infectious anemia (EIA) is a viral infection, caused by a lentivirus of the Retroviridae family, Orthoretrovirinael subfamily and its occurrence generates significant economic losses due to culling of positive animals as a measure of infection control. The objective of this work was to determine the prevalence of horses positive for equine infectious anemia virus (EIAV) and to identify the occurrence of areas with higher densities of cases in the states of Paraíba (PB), Pernambuco (PE), Rio Grande do Norte (RN) and Ceará (CE), Northeast region of Brazil, during the rainy (May and June) and dry (October and November) periods of 2017 and 2018. Serum samples from 6,566 horses from the states of PB, PE, RN and CE, Brazil, provided by the Laboratório Veterinária Diagnóstico - Ltda., were used. Serological diagnosis of EIA was performed using indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) as a screening test and agar gel immunodiffusion test (AGID) as a confirmatory test. The apparent prevalence was obtained by dividing the number of seroreactive animals by the total number of animals, while the true prevalence was estimated by adjusting the apparent prevalence, considering the sensitivity (100%) and specificity (98.6%) of the diagnostic protocol used. For the construction of Kernel estimates, the Quartic function was used. In the dry season, of the 1,564 animals sampled, 28 were serologically positive, of which 19 belonged to the state of Ceará, 7 to Paraíba and 2 to Rio Grande do Norte. In 2018, it was observed that, during the rainy season, 26 of the 1,635 horses were seroreactive, with 19 cases resulting from Ceará, 4 from Paraíba and 3 from Pernambuco. In the dry season, 32 of the 1,526 animals were seroreactive to EIAV, of which 26 were from Ceará, 3 from Paraíba, 1 from Rio Grande do Norte and 2 from Pernambuco. In the dry period of 2017, the CE had a real prevalence of 1.22% (95% CI = 0.05 - 2.99%). In 2018, during the rainy season, prevalences of 0.03% (95% CI = 0 - 1.18%) were identified in CE and 1.69% (95% CI = 0 - 8.38%) in PE. Regarding the 2018 dry period, a prevalence of 1.32% (95% CI = 0.26 - 2.84%) was found in the state of CE. In both dry and rainy periods of 2017, the presence of spatial clusters of animals positive for EIA was observed, mainly in the border areas among the states of CE, PE, PB and RN. In 2018, there was a variation in the distribution of areas with higher densities of cases between the rainy and dry periods. The state of CE had the highest prevalence of positive animals and the presence of areas with higher densities of EIA cases in both climatic periods, in the years 2017 and 2018. In some municipalities of the CE, important sporting events of agglomeration of animals take place, which can favor the transmission of EIAV by facilitating the contact of infected and susceptible animals. Population density may be a factor associated with the higher prevalence observed in this region, as it has the second largest herd among the states studied. Higher densities indirectly contribute to the occurrence of infectious diseases, as they favor the contact of infected and susceptible animals. The occurrence of higher densities of cases in the border areas of the states of PE, RN, CE, and PB may be related to the greater movement of animals in these regions, favoring the indirect contact of infected horses with susceptible ones. The observed results demonstrate the circulation of the EIAV in four states in the Northeast region of Brazil.(AU)

Performance of the Dot-blot test method for detecting antibodies to Sarcocystis spp. in cattle / Desempenho do teste Dot-blot para detecção de anticorpos para Sarcocystis spp. em bovinos

Serological techniques can detect antibodies against Sarcocystis spp., Neospora caninum and Toxoplasma gondii antigens in single or mixed infections. Immunofluorescent antibody tests (IFAT) is considered the gold standard technique for Sarcocystosis diagnostic in cattle serum and a positive IFAT result reflects Sarcocystis spp. infection. Therefore, the aims of the present study were to compare IFAT and Dot-blot for sarcocystosis diagnostic in experimentally infected mice and to investigate serological cross-reactions with N. caninum and T. gondii in these methods. Mice (Mus musculus) were inoculated intraperitoneally with bradizoites of Sarcocystis spp. or tachyzoites of N. caninum or T. gondii. Serum samples were obtained and analyzed by IFAT and Dot-blot for the three protozoa. Serum from N. caninum and T. gondii experimentally infected mice were tested by IFAT and reacted only to N. caninum or T. gondii antigens, respectively. Specific antibodies against Sarcocystis spp. were present in all animals experimentally infected with this protozoan, with IFAT titers from 10 to 800. Serum samples from mice experimentally infected with Sarcocystis spp., N. caninum and T. gondii and tested by Dot-blot demonstrated no cross reaction between protozoa. A Dot-blot using Sarcocystis spp. antigen appears to be a good alternative to IFAT in the serological diagnosis of Sarcocystosis.(AU)

As técnicas sorológicas podem detectar anticorpos contra os antígenos de Sarcocystis spp., Neospora caninum e Toxoplasma gondii em infecções únicas ou mistas. O teste de anticorpos imunofluorescentes (IFAT) é considerado a técnica padrão-ouro para o diagnóstico de sarcocistose no soro de bovinos e um resultado positivo de IFAT reflete Sarcocystis spp. infecção. Portanto, os objetivos do presente estudo foram comparar IFAT e Dot-blot para diagnóstico de sarcocistose em camundongos infectados experimentalmente e investigar reações cruzadas sorológicas com N. caninum e T. gondii nesses métodos. Os camundongos (Mus musculus) foram inoculados intraperitonealmente com bradizoítos de Sarcocystis spp. ou taquizoítos de N. caninum ou T. gondii. As amostras de soro foram obtidas e analisadas por IFAT e Dot-blot para os três protozoários. O soro de N. caninum e T. gondii infectados experimentalmente foram testados por IFAT e reagiram apenas aos antígenos de N. caninum ou T. gondii, respectivamente. Anticorpos específicos contra Sarcocystis spp. estavam presentes em todos os animais experimentalmente infectados com este protozoário, com títulos de IFAT de 10 a 800. Amostras de soro de camundongos infectados experimentalmente com Sarcocystis spp., N. caninum e T. gondii e testadas por Dot-blot não demonstraram reação cruzada entre protozoários. Um Dot-blot usando Sarcocystis spp. O antígeno parece ser uma boa alternativa ao IFAT no diagnóstico sorológico da sarcocistose.(AU)

Serological survey of bluetongue virus in sheep from Minas Gerais / Inquérito sorológico do vírus da língua azul em ovinos de Minas Gerais

Bluetongue is an infectious, non-contagious disease that affects domestic and wild ruminants, caused by a virus from the Orbivirus genus, Reoviridae family, transmitted by arthropod vectors of the Culicoides genus. This paper aims to be the first serological survey of bluetongue in sheep from the Meso-regions of Campo das Vertentes and South and Southeast of Minas Gerais. Samples were collected from sheep from different properties. The serum samples were submitted to Agar Gel Immunodiffusion (AGID) and competitive Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (cELISA). 303 serum samples were submitted to AGID and cELISA. In these samples, 164 (54.13%) were positive in the AGID technique, and 171 (56.44%) positive in the cELISA technique, with an almost perfect agreement between the techniques (kappa index = 0.887). In all visited properties, positive animals have been found in the herd. Animals acquired from properties of the studied mesoregions were more likely to be positive in IDGA and cELISA tests than animals acquired from properties in other regions of Brazil (p<0.001). These results suggest that bluetongue virus (BTV) is widespread in the mesoregions of Campo das Vertentes and South and Southeast of Minas Gerais.(AU)

A língua azul (LA) é uma doença infecciosa, não contagiosa, que acomete ruminantes domésticos e silvestres, causada por um vírus do gênero Orbivirus da família Reoviridae, transmitida por vetores artrópodes do gênero Culicoides. O presente estudo representa o primeiro trabalho a realizar um inquérito sorológico da língua azul em rebanhos ovinos nas Mesorregiões de Campo das Vertentes e Sul e Sudoeste de Minas Gerais. Foram coletadas amostras de soro de ovinos de diferentes propriedades. As amostras de soro foram submetidas aos testes de imunodifusão em gel de ágar (IDGA) e ensaio de imunoadsorção enzimática por competição (cELISA). Ao todo 303 amostras de soro foram submetidas ao IDGA e cELISA. Dessas amostras, 164 (54,13%) foram positivas na técnica de IDGA e 171 (56,44%) positivas na técnica de cELISA, havendo concordância quase perfeita entre as técnicas (índice kappa = 0,887). Em todas as propriedades visitadas, foram encontrados animais positivos no rebanho. Animais adquiridos de propriedades das Mesorregiões estudadas, tiveram mais chances de serem positivos nos testes de IDGA e cELISA do que animais adquiridos de propriedades de outras Regiões do Brasil (p<0,001). Esses resultados sugerem que o vírus da língua azul encontra-se disseminado em ovinos nas Mesorregiões de Campo das Vertentes e Sul e Sudoeste de Minas Gerais.(AU)

High proportion of cattle and sheep seropositive and renal carriers of Leptospira sp. under semiarid conditions / Alta proporção de bovinos e ovinos soropositivos e portadores renais de Leptospira sp. em condições semiáridas

The aims of this study were to perform serological and molecular detection of Leptospira sp. infection in cattle and sheep under semiarid conditions. Based on a preliminary study performed in our research group, we selected six rural properties showing a positivity ≥ 60% for Sejroe serogroup with titer ≥ 200 measured in serological tests from cattle. In the present study, blood and urine samples were collected from 99 females of reproductive age (51 cattle and 48 sheep) for serological diagnosis, molecular detection and Leptospira sp. attempt to strain recovery. Of the 99 analyzed animals 38.4% (38/99) were positively reactive at the serological tests. Of them, 49% (25/51) were cattle and 27.1% (13/48) sheep. The serogroups detected in cattle were Sejroe (36.8%), Hebdomadis (26.3%), Australis (10.5%), Djasiman (10.5%), Ballum (5.3%), Pomona (5.3%), and Cynopteri (5.3%) with titers of 100­800. In sheep, the reactive serogroups were Australis (27.3%), Ballum (27.3%), Djasiman (18.1%), Tarassovi (9.1%), Icterohaemorrhagiae (9.1%), and Cynopteri (9.1%) with titers of 100­400.Leptospiral DNA was detected in nine urine samples, including five cattle and four sheep. Property 1 showed the highest serological positivity frequencies for both cattle (70.6%) and sheep (70.6%). Similarly, the highest frequency of DNA detection was also found (eight samples, 89%). In this property, we observed the existence of consorted rearing of cattle and sheep with close coexistence between these species. In semiarid conditions, transmission among animals of the same species seems to be the main form of Leptospira sp. dissemination in cattle and sheep herds. However, the contribution of other domestic and wild animals cannot be discarded. The practice of consorted rearing of cattle and sheep and their close coexistence may facilitate the spread of the pathogen in rural properties.

Os objetivos deste estudo foram realizar detecção sorológica e molecular da infecção por Leptospira sp. em bovinos e ovinos em condições semiáridas. Com base em estudo preliminar realizado em nosso grupo de pesquisa, foram selecionadas seis propriedades rurais com soropositividade ≥ 60% para o sorogrupo Sejroe com título ≥ 200 em bovinos. No presente estudo, amostras de sangue e urina foram coletadas de 99 fêmeas em idade reprodutiva (51 bovinos e 48 ovinos) para diagnóstico sorológico, detecção molecular e tentativa de recuperação de estirpesde Leptospira sp. Dos 99 animais analisados, 38,4% (38/99) foram sororeativos nos testes sorológicos. Destes, 49% (25/51) eram bovinos e 27,1% (13/48) ovinos. Os sorogrupos detectados em bovinos foram Sejroe (36,8%), Hebdomadis (26,3%), Australis (10,5%), Djasiman (10,5%), Ballum (5,3%), Pomona (5,3%) e Cynopteri (5,3%) com títulos de 100 a 800. Nos ovinos, os sorogrupos reativos foram Australis (27,3%), Ballum (27,3%), Djasiman (18,1%), Tarassovi (9,1%), Icterohaemorrhagiae (9,1%) e Cynopteri (9,1%) com títulos de 100-400. O DNA leptospiral foi detectado em nove amostras de urina, incluindo cinco bovinos e quatro ovinos. A propriedade 1 apresentou as maiores frequências de positividade sorológica para bovinos (70,6%) e ovinos (70,6%). Da mesma forma, a maior frequência de detecção de DNA também foi encontrada (oito amostras, 89%). Nesta propriedade observou-se a existência de criação consorciada de bovinos e ovinos com estreita convivência entre estas espécies. Em condições semiáridas, a transmissão entre animais da mesma espécie parece ser a principal forma de disseminação de Leptospira sp. em rebanhos bovinos e ovinos. No entanto, a contribuição de outros animais domésticos e selvagens não pode ser descartada. A prática de criação consorciada de bovinos e ovinos e sua estreita convivência podem facilitar a disseminação do patógeno em propriedades rurais.

Evaluation of the performance of three serological tests for diagnosis of Leishmania infantum infection in dogs using latent class analysis / Avaliação da realização de três testes sorológicos para diagnóstico de infecção por Leishmania infantum em cães utilizando análise de classe latente

Abstract Canine leishmaniasis (CanL) is a disease caused by Leishmania infantum. Serological methods are the most common diagnostic techniques used for the diagnosis of the CanL. The objective of our study was to estimate the sensitivity and specificity of one in-house ELISA kit (ELISA UNIZAR) and three commercially available serological tests (MEGACOR Diagnostik GmbH) including an immunochromatographic rapid test (FASTest LEISH®), an immunofluorescent antibody test (MegaFLUO LEISH®) and an enzyme-linked immunosorbent assay (MegaELISA LEISH®), using latent class models in a Bayesian analysis. Two hundred fifteen serum samples were included. The highest sensitivity was achieved for FASTest LEISH® (99.38%), ELISA UNIZAR (99.37%), MegaFLUO LEISH® (99.36%) followed by MegaELISA LEISH® (98.49%). The best specificity was obtained by FASTest LEISH® (98.43%), followed by ELISA UNIZAR (97.50%), whilst MegaFLUO LEISH® and MegaELISA LEISH® obtained the lower specificity (91.94% and 91.93%, respectively). The results of present study indicate that the immunochromatographic rapid test evaluated FASTest LEISH® show similar levels of sensitivity and specificity to the quantitative commercial tests. Among quantitative serological tests, sensitivity and specificity were similar considering ELISA or IFAT techniques.

Resumo A leishmaniose canina (Lcan) é uma causada pela Leishmania infantum. Os métodos sorológicos são as técnicas diagnósticas mais utilizadas para o diagnóstico da leishmaniose canina. O objetivo do nosso estudo foi estimar a sensibilidade e a especificidade de um kit ELISA interno (ELISA UNIZAR) e de três testes sorológicos disponíveis comercialmente, feitos pelo mesmo fabricante (MEGACOR Diagnostik GmbH), incluindo um teste rápido imunocromatográfico (FASTest LEISH®), um teste de anticorpos imunofluorescentes (Megafluo LEISH®) e um ensaio de imunoabsorção enzimática (Megaelisa LEISH®), utilizando-se modelos de classe latentes numa análise bayesiana. Foram incluídas duzentas e quinze amostras de soro. A maior sensibilidade foi alcançada para Fastest LEISH® (99,38%), ELISA UNIZAR (99,37%), Megafluo LEISH® (99,36%) seguida por Megaelisa LEISH® (98,49%). A melhor especificidade foi obtida por FASTest LEISH® (98,43%), seguida por ELISA UNIZAR (97,50%), enquanto Megafluo LEISH® e Megaelisa LEISH® obtiveram a menor especificidade (91,94% e 91,93%, respectivamente). Os resultados do presente estudo indicam que o teste rápido imunocromatográfico, avaliado por FASTest LEISH® mostra níveis similares de sensibilidade e especificidade aos testes comerciais quantitativos incluídos. Entre os testes sorológicos quantitativos, a sensibilidade e a especificidade foram semelhantes, considerando-se as técnicas de ELISA ou IFI.

Expression and antigenic analysis of the recombinant TRP36 protein from Ehrlichia canis São Paulo strain for serologic tests / Expressão e análise antigênica da proteína RTP36 recombinante da amostra São Paulo de Ehrlichia canis para testes sorológicos

Abstract Ehrlichia canis is the main etiological agent of canine monocytic ehrlichiosis (CME), a globally canine infectious disease. In Brazil, CME is considered to be endemic, and its prevalence can reach 65% in some states. The diagnosis of ehrlichiosis is important for treatment and epidemiological purposes. The E. canis TRP36 (Tandem Repeat Protein) protein elicits the earliest acute-phase antibody response observed during the course of the disease. This study aimed to generate the recombinant TRP36 protein from E. canis São Paulo strain and to evaluate its potential as a tool for the serologic diagnosis of CME. The E. canis São Paulo isolate was cultivated in DH82 lineage cells, and its genomic DNA was obtained. The bacterial DNA fragment encoding the entire ORF of TRP36 was cloned into the pBAD/Thio-TOPO vector and transformed into Escherichia coli DH10B competent cells with the trp36-bearing plasmid for protein expression. To evaluate the protein antigenicity, 16 canine serum samples were previously tested (by PCR and the commercial SNAP®4Dx® serological test). The results were in accordance with the SNAP®4Dx® test. Experiments using this recombinant protein as an antigen, targeting the development of a serologic test based on ELISA methodology, are the next step to produce a reliable, affordable and useful diagnostic tool for CME in Brazil.

Resumo Ehrlichia canis é o principal agente etiológico da erliquiose monocítica canina (EMC), uma doença infecciosa canina globalmente dispersa. No Brasil, a EMC é considerada endêmica, e a infecção pode atingir 65% em cães em alguns estados. O diagnóstico de erliquiose é importante para fins de tratamento e epidemiológicos. A proteína TRP36 de E. canis leva a uma resposta humoral com produção de anticorpos em fase aguda, encontrada durante o curso da doença. O objetivo deste estudo foi obter a proteína TRP36 recombinante da amostra São Paulo de E. canis e avaliar seu potencial como ferramenta para o diagnóstico sorológico da CME. O isolado de E. canis São Paulo foi cultivado em células da linhagem DH82 e o DNA genômico foi obtido. O fragmento de DNA bacteriano que codifica toda a ORF de TRP36 foi clonado no vetor pBAD / Thio-TOPO e transformado em células competentes Escherichia coli DH10B, com o plasmídeo portador de trp36 para expressão de proteínas. Para avaliar a antigenicidade da proteína, 16 amostras de soro canino foram previamente analisadas (por PCR e teste sorológico comercial SNAP®4Dx®). Os resultados estavam de acordo com o teste SNAP®4Dx®. Os experimentos que utilizam essa proteína recombinante como antígeno, visando ao desenvolvimento de um teste sorológico baseado no ELISA, são o próximo passo para produzir um teste de diagnóstico confiável, acessível e útil para o diagnóstico da EMC no Brasil.

Efficacy and limitations of different approaches to anticipate the diagnosis of pregnancy in cattle / Eficácia e limitações de diferentes abordagens para antecipar o diagnóstico de gestação em bovinos

The study evaluated sonographic and serologic exams performed for early (20 to 30d) diagnosis of pregnancy. One hundred-twenty (n= 120) bovine recipients were synchronized (estrous=D0) and timed embryo transferred (TET, D7) with fresh in vitro produced embryos. In the first trial (n= 46), diagnosis of pregnancy was performed on day 20 (D20) by detecting CL blood flow (BF) and by Pregnancy-Associated Glycoproteins (PAGs) serology. In the second trial (n= 30), pregnancy diagnosis was performed on D25 by ultrasound visualization of uterine contents and by PAGs serology. In the last trial, PAG's serology was performed on D30. Ultrasonographic detection of the uterine contents and embryo viability performed on D30 (DG30) was considered the gold standard. The PROC FREQ procedure was used to test the agreement between diagnostic methods. On D20, the Doppler ultrasonography of the CL had showed high sensitivity (100%), but only moderate specificity (53.3%). On the same day, serologic diagnostic had no agreement (k= -0.08, P< 0.46) with the gold standard, with very low sensitivity (6.3%). However, the sensitivity of the serologic exam increased dramatically (from 6.3 to 100%) from D20 to D25, and it contributed to detect false negatives from the ultrasound diagnosis, improving the overall accuracy from 90% to 96.7%.(AU)

O estudo foi planejado para correlacionar exames ultrassonográficos e sorológicos realizados para o diagnóstico precoce (20 a 30d) de gestação. Cento e vinte (n= 120) receptoras bovinas foram sincronizadas (estro=D0), e embriões frescos produzidos in vitro foram transferidos em tempo fixo (TETF, D7). No experimento 1 (n= 46), o diagnóstico de gestação foi realizado no D20, pela detecção do fluxo sanguíneo do CL e pela sorologia de glicoproteínas associadas à gestação (PAGs). No experimento 2 (n= 30), a detecção da gestação foi realizada por meio da visualização do conteúdo do útero e também pela sorologia para PAGs. No experimento 3, a sorologia para PAGs foi realizada no D30. Em todos os experimentos, a visualização ultrassonográfica da vesícula e da viabilidade embrionária, realizada no D30, foi considerada padrão-ouro. O procedimento PROC FREQ testou o nível de concordância dos métodos diagnósticos. No D20, o diagnóstico baseado na vascularização do CL mostrou alta sensibilidade (100%) e apenas moderada especificidade (53,3%). Nesse mesmo dia, o diagnóstico sorológico não apresentou concordância (k=-0,08, P<0,46) com o padrão-ouro, além de baixa sensibilidade (6,3%). No entanto, a sensibilidade do exame sorológico aumentou drasticamente (6,3 para 100%) do D20 para o D25, contribuindo para detectar falsos negativos diagnosticados pela ultrassonografia, melhorando a acurácia (90 para 96,7%).(AU)

Variações fisiológicas, influência da idade e sexo no perfil bioquímico sanguíneo de aves da linhagem pesada de frango de corte na fase de recria / Physiological variations and influence of age and gender on poultry of heavy lineage of chicken´s biochemical profile during the rearing stage

Este estudo teve o objetivo de comparar o perfil bioquímico sérico de machos e fêmeas da linhagem pesada de frango de corte, nas idades de quatro, 12 e 20 semanas, em uma unidade de produção industrial, no município de Uberlândia-MG. Após a pesagem das aves, foram coletadas amostras de sangue de 15 aves de cada sexo de cada faixa etária. Os soros obtidos foram avaliados em analisador automático para os seguintes parâmetros bioquímicos: proteína total, albumina, globulinas, ácido úrico, colesterol, triglicérides, gamaglutamiltransferase, aspartato aminotransferase, alanina aminotransferase, creatina quinase, fosfatase alcalina, cálcio e fósforo. Imediatamente após a coleta de cada amostra, avaliou-se a glicemia no sangue total, utilizando-se um glicosímetro. As alterações fisiológicas e metabólicas que as aves apresentaram na fase de recria refletiram na variação dos níveis bioquímicos séricos na maioria dos constituintes avaliados, os quais exibiram diferenças significativas (P<0,05), comparando-se sexo e idade.(AU)

This study aimed to compare the levels of glucose in the blood and serum´s metabolites enzymes and minerals of poultry of heavy lineage of chicken at the age of four, twelve and twenty weeks in an industrial production unit in the city of Uberlândia-MG. After weighing the birds, blood samples were collected from 15 birds of each gender in the three ages. The serum obtained was evaluated in an automatic biochemical analyzer for the following parameters: total protein, albumin, globulin, uric acid, cholesterol, triglycerides, alkaline phosphatase, gamma-glutamyl transferase, aspartate aminotransferase, alanine aminotransferase, creatine kinase, calcium and phosphorus. Immediately after the collection of each sample, we evaluated glucose levels by means of a glycosimeter. The physiological and metabolic changes that birds present in the rearing age reflected in the variation of serum biochemical levels in most constituents evaluated, showing significant differences (P< 0.05) comparing age and gender.(AU)

Canine monocytic ehrlichiosis in Buenos Aires, Argentina: comparison of serological and molecular assays / Ehrlichiose monocítica canina em Buenos Aires: comparação de testes serológicos e moleculares

Canine monocytic ehrlichiosis (CME) is an infectious disease caused by the bacterium Ehrlichia canis and transmitted by Rhipicephalus sanguineus sensu lato, a tick with worldwide distribution. When not diagnosed and treated early, disease can be severe. Currently, the disease is confirmed by serological or molecular assays. The objective of this study was to compare a serological assay based on immunochromatography (SPEED® EHRLI immunochromatographic test; BVT, France) and a molecular assay (a screening PCR followed by a nested PCR specific for E. canis) for the diagnosis of E. canis in suspected dogs from Buenos Aires city and southern Greater Buenos Aires, Argentina. Blood samples from 20 clinically healthy dogs (Control Group) and from 80 sick dogs suspected of having CME (Groups 1 to 4) were tested in parallel. Neither the immunochromatographic test nor the PCR assay was able to detect the presence of E. canis in the Control Group. In the group which had been previously tested by serology, the agreement between the tests was low (kappa: 0.200), whereas in the group which had been previously tested by PCR, the concordance between the tests was adequate (kappa: 0.650). The concordance between the tests evaluated in the total population studied was moderate (kappa: 0.496). The results of our study suggest that the use of rapid serological tests as a first approach, together with subsequent confirmation by PCR, will improve the diagnosis of CME.(AU)

A ehrlichiose monocítica canina (CME) é uma doença infecciosa transmitida pelo carrapato Rhipicephalus sanguineus sensu lato com distribuição mundial causada por Ehrlichia canis, que pode produzir uma doença grave se não foi diagnosticada e tratada precocemente. A confirmação da doença é feita diretamente pela detecção do DNA fazendo a reação em cadeia da polimerase (PCR) ou indiretamente por métodos sorológicos. O objetivo deste estudo foi comparar o método sorológico baseado na imunocromatografia e a técnica de PCR para o diagnóstico de E. canis em cães suspeitos da Cidade de Buenos Aires e da região sul da Grande Buenos Aires. As amostras de sangue de 20 cães clinicamente saudáveis (Grupo Controle) e de 80 cães com suspeita clínica de CME (Grupo 1-4) foram avaliadas em paralelo. O diagnóstico serológico foi feito pelo teste imunocromatográfico SPEED® EHRLI (BVT, França). Para a detecção molecular, foi utilizada uma PCR de triagem para amplificar um fragmento de 345 pb do gene que codifica a subunidade 16S do rRNA da família Anaplasmataceae. As amostras positivas depois foram processadas pela PCR aninhada específica para E. canis. No Grupo Controle, a presença de E. canis não foi detectada por PCR ou anticorpos específicos com o teste imunocromatográfico. No grupo em que a sorologia foi solicitada inicialmente (1 e 2), a concordância entre os testes foi baixo (kappa: 0,200) enquanto que no grupo onde o teste inicialmente solicitado foi a PCR, a concordância entre os testes era adequado (kappa: 0,650). A concordância entre os testes avaliados na população total estudada foi moderada (kappa: 0,496). Em conclusão, os resultados do nosso estudo sugerem que o uso de testes serológicos rápidos inicialmente, juntamente com a confirmação subsequente por PCR, permitirá melhorar o diagnóstico de CME.(AU)

Análise molecular para Toxoplasma gondii em linguiças suínas defumadas / Molecular analysis for Toxoplasma gondii in smoked swine sausages

A toxoplasmose é causada pelo protozoário Toxoplasma gondii, o qual acomete os humanos através da ingestão de carne mal passada ou crua. O presente trabalho descreve o emprego de PCR em linguiças suínas defumadas (salames) para detecção de T. gondii, aliado a utilização do teste de imunofluorescência indireta na avaliação sorológica de suínos encaminhados para abate. No estudo, avaliaram-se 18 amostras de salames e 50 amostras de soro sanguíneo de suínos. Na PCR todas as amostras de salames se apresentaram negativas e no teste de imunofluorescência indireta 8% dos animais foram positivos para T. gondii. Embora PCR-negativas, as linguiças produzidas originaram-se de matéria-prima suína proveniente de estabelecimento de abate, cujo presente estudo identificou soroprevalência de 8% para o protozoário. Dessa forma, o consumo de carne mal passada ou crua e de produtos a base de carne crua, como os salames, devem ser evitados, principalmente, em grupos de risco como crianças e idosos.

Avaliação de dois testes sorológicos comerciais para diagnóstico das infecções pelo FIV e pelo FeLV / Evaluation of two point-of-care tests to diagnosis of FIV and FeLV infections

FIV e FeLV são retrovírus associados principalmente com neoplasias. Dois testes rápidos são disponibilizados no Brasil para o diagnóstico dessas infecções: um kit de imunocromatografia de fluxo bidirecional (SNAP® Combo IDEXX) e um kit de imunocromatografia de fluxo lateral unidirecional (ALERE/BIONOTE Anigen Rapid). O objetivo deste estudo foi comparar o teste SNAP® com o teste ALERE. Amostras de sangue de 178 gatos foram testadas utilizando-se ambos os kits. A reação em cadeia de polimerase em tempo real (qPCR) foi empregada como método confirmatório para todos os resultados. O teste SNAP® apresentou sensibilidade e especificidade de 100% para FIV; a sensibilidade e a especificidade do teste ALERE foram de 96,15% e 98,68%, respectivamente. A sensibilidade e a especificidade para o FeLV foram de 93,02% e 96,30% para o teste SNAP® e de 90,70% e 97,78% para o teste ALERE. Ainda em relação ao FeLV, três amostras com resultado positivo na qPCR obtiveram resultado falso-negativo em ambos os testes. Não houve diferença estatisticamente significante entre os métodos. Considerando a qPCR como padrão-ouro, o teste SNAP® apresentou maior sensibilidade e especificidade para o FIV, e o teste ALERE apresentou maior especificidade para o FeLV. Os resultados mostraram uma boa correlação entre os testes.(AU)

FIV and FeLV are Retrovirus associated mainly with feline neoplasms. Two point-of-care tests are commercially available in Brazil for diagnosis of these infections: a bidirectional flow immunochromatography kit (IDEXX SNAP ® Combo) and a lateral unidirectional flow immunochromatography kit (ALERE/BIONOTE Anigen Rapid). The aim of this study was to compare SNAP ® and ALERE tests. Blood samples obtained from 178 cats were evaluated using both tests. Quantitative real-time polymerase chain reaction (qPCR) was used as confirmatory test for all samples. The sensitivity and specificity of SNAP ® test was 100% for FIV, and for ALERE test was 96.15% and 98.68%, respectively. The sensitivity and specificity for FeLV was 93.02% and 96.30% for SNAP ® test and 90.70% and 97.78% for ALERE test. Three samples with a qPCR positive result for FeLV obtained a false negative result in both SNAP ® and ALERE tests. There was no statistically significant difference between the two methods. Considering qPCR as gold standard method, the SNAP® test showed higher sensitivity and specificity for FIV, and the ALERE test presented higher specificity for FeLV. The results showed good agreement among the tests.(AU)

Soropositividade para Leptospira sp. e sorogrupos predominantes em cães do Pantanal Brasileiro / Seropositivity for Leptospira sp. and predominant serogroups in dogs from the Brazilian Pantanal

Em face à grande importância que a leptospirose possui no contexto sanitário mundial, tanto no aspecto humano como animal, este estudo teve por objetivo realizar a pesquisa de anticorpos anti-Leptospira sp. pela técnica de Soroaglutinação Microscópica (SAM) em 429 amostras de soros de cães provenientes de quatro municípios (Poconé/MT, Santo Antônio de Leverger/MT, Barão de Melgaço/MT e Corumbá/MS) localizados na região do Pantanal Brasileiro, bem como foram verificadas possíveis associações entre os resultados dos exames sorológicos e respostas aos questionários epidemiológicos aplicados aos proprietários. Do total de cães avaliados pela SAM (título ≥100), verificou-se que 34 (7,93%; IC 95%: 5,63%-11,00%) cães tinham anticorpos anti-Leptospira sp. Os títulos encontrados variaram entre 100 e 1600 e todos os municípios analisados tinham cães sororreagentes ao agente pesquisado. O sorogrupo reator mais frequente foi o Icterohaemorrhagiae, seguido pelo Australis. Por outro lado, foram observadas menores proporções de cães reagentes aos sorogrupos Tarassovi, Hebdomadis, Autumnalis e Grippotyphosa. As variáveis associadas com a ocorrência de leptospirose foram habitat rural (P<0,01) e área alagável (P=0,01). Estes resultados demonstram que os cães da região pantaneira tiveram contato com agentes do gênero Leptospira, o que representa uma informação relevante para a saúde pública local devido à importância zoonótica da doença.

Given the great importance that leptospirosis has the global health context, both in human and animal aspect, this study aimed to search for antibodies anti-Leptospira sp. by the technique of microscopic agglutination test (MAT) in 429 samples of sera from dogs from four municipalities (Poconé/MT, Santo Antônio de Leverger/MT, Barão de Melgaço/MT and Corumbá/MS) located in the Brazilian Pantanal region, in order for determine associations between the results of the serological tests and answers to epidemiological questionnaires applied to owners. Of the total dogs evaluated by MAT (titer ≥100), it was verified that 34 (7.93%, 95% CI: 5.63% -11.00%) dogs had antibodies against Leptospira sp. The titers found ranged from 100 to 1600 and all municipalities analyzed had seroreactive dogs for the investigated agent. The most frequent serogroup reactor was Icterohaemorrhagiae, followed by Australis. On the other hand, smaller proportions of reactive dogs were observed for serogroups Tarassovi, Hebdomadis, Autumnalis and Grippotyphosa. The variables associated with the occurrence of leptospirosis were rural habitat (P<0.01) and flooded area (P=0.01). These results demonstrate that dogs from the Pantanal region had contact with agents of the genus Leptospira, which represents information relevant to local public health due to the zoonotic importance of the disease.

First molecular and serological detection of Epizootic Hemorrhagic Disease virus in white tailed deer ( Odocoileus virginianus ) from Tamaulipas, Mexico / Primeira detecção molecular e sorológica do vírus Doença Hemorrágica Epizoótica em veados de cauda branca (Odocoileus virginianus) de Tamaulipas, Mexico

Epizootic hemorrhagic disease viruses (EHDV) are dsRNA arboviruses transmitted by biting midges of the genus Culicoides that cause disease in domestic and wild ruminants. Epizootic hemorrhagic disease (EHD) is considered the most important infectious disease of white tailed deer (WTD) in North America, some studies in Northeast Mexico reported EHDV-seropositive WTD and EHDV-infected Culicoides vectors. The increasing population of WTD that share habitat with livestock in Northeast México highlights the importance of EHD for the livestock industry in the transboundary region with the U.S. One hundred and twenty two samples from WTD in Tamaulipas state, Mexico were tested by ELISA and RT-PCR for EHDV antibodies and nucleic acid, respectively. Twelve animals were seropositive to ELISA and eleven animals were positive by RT-PCR. This is the first report of EHDV nucleic acid detection in WTD from Mexico. It is hypothesized that applying the transboundary disease approach to interdisciplinary research will help fill knowledge gaps, which could help develop countermeasures to mitigate the threat of EHDV infection in wildlife and livestock along the U.S.-Mexico border.(AU)

Virus da doença hemorrágica epizoótica (EHDV) são arbovírus dsRNA transmitidos por mordidas do genus Culicoides que causam doenças em ruminantes domésticos e selvagens. Doença hemorrágica epizoótica (EHD) é considerada uma das doenças infecciosas mais importantes dos veados de cauda branca (WTD) na América do Norte. Alguns estudos no Nordeste do México relatam soropositividade para EHDV em WTD e vetores Culicoides infectados com EHDV. A crescente população de WTD que compartilham hábitats com pecuária no Nordeste do México realçam a importância de EHD para a indústria pecuária na região de fronteira com os Estados Unidos. Cento e vinte duas amostras de WTD no estado de Tamaulipas, Mexico, foram testados por ELISA e RT-PCR para anticorpos e ácido nucleico de EHDV, respectivamente. Esse é o primeiro relato de detecção de ácido nucleico de EHDV em WTD do México. A hipótese é de que a aplicação de uma resposta transfronteira e pesquisa interdisciplinar ajudará a preencher lacunas de conhecimento levando a medidas reativas para mitigar a ameaça de infecção por EHDV na pecuária e animais selvagens na fronteira entre os Estados Unidos e o Mexico.(AU)

Serological response to Neospora caninum infection in goats and agreement between three diagnostic techniques to detect caprine neosporosis / Resposta sorológica à infecção por Neospora caninum em cabras e concordância entre três técnicas diagnósticas para detecção de neosporose caprina

The present study aimed to measure the serological response of goats infected with Neospora caninum by assessing the diagnostic performance and agreement between three techniques (indirect immunofluorescent antibody test, IFAT; Neospora agglutitation test, NAT; enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA). The panel of sera were comprised of 500 samples of goats, and 60 reference serum samples. These reference and field serum samples were tested by ELISA, NAT, and IFAT. In the field serum samples tested, the seroprevalences of anti-N. caninum antibodies were 3.2%, 4.6%, and 6.4% in the NAT, IFAT and ELISA, respectively. Using the IFAT as the gold standard, the NAT and the ELISA agreement was considered weak (k=0.28) and strong (k=0.75), respectively. When the IFAT performance was used for comparison purposes, the ELISA showed 91.3% sensitivity and 97.7%, specificity with a PPV of 65.2% and a NPV of 99.6%; The NAT presented sensitivity of 26.1% and specificity of 97.9% with a PPV of 37.5% and a NPV of 96.5%. Accordingly, the IFAT should remain the assay of choice for studies about N. caninum infection in goats in individual serum samples. A combination of serological assays with high sensitivity and specificity is recommended in serosurveys of caprine neosporosis.(AU)

Objetivou-se avaliar a resposta sorológica de caprinos infectados com Neospora caninum mediante o estudo da performance e concordância de três técnicas sorológicas (RIFI, NAT e ELISA). O painel de soros testes foi composto por 500 amostras de caprinos e ainda 60 soros classificados como de referência. Todos os soros de referência e de campo foram testados por ELISA, NAT e RIFI. Nos soros de campo, as soroprevalências de anticorpos anti-N. caninum foram de 3,2% no NAT, 4,6% na RIFI e 6,4% no ELISA. Utilizando a RIFI como técnica de referência, a concordância de NAT e ELISA foi considerada fraca (k=0,28) e substancial (k=0,75), respectivamente. Ainda utilizando a RIFI como comparação, foram obtidos valores de sensibilidade de 91,3% e 97,7% de especificidade no ELISA, e valores preditivos positivo de 65,2% e negativo de 99,6%; NAT apresentou resultados de sensibilidade de 26,1% e de especificidade de 97,9% com valores preditivos positivo de 37,5% e negativo de 96,5%. Com base nos resultados deste trabalho, sugerimos que a RIFI permaneça como técnica de escolha no estudo da neosporose caprina em amostras individuais, resguardando as recomendações e pontos de corte adotados neste estudo. Indicamos a associação de técnicas sorológicas de alta sensibilidade e especificidade.(AU)

Correlation of feline immunodeficiency virus status and the severity of feline chronic gingivostomatitis / Correlação do status sorológico para FIV e a gravidade da gengivoestomatite crônica felina

Feline chronic gingivostomatitis (FCGS) is a challenge for the veterinary practitioner since its etiology and treatments are still undefined. The present paper investigated the role of the feline immunodeficiency virus (FIV) in the severity of the FCGS. Oral mucosal biopsies obtained from 19 cats with FCGS were divided into two groups according to their FIV serology status. Later, the clinical lesion score was correlated with the histopathological grade of FCGS lesions and the degree of immunostaining in both groups. Most of the animals had significant histological changes; however, no correlation with FIV immunostaining intensity was observed. It was concluded that the presence of FIV infection or the animal's seropositivity status does not seem to interfere with the severity of clinical signs nor the degree of histopathological changes when compared to the seronegative group.(AU)

A gengivoestomatite crônica felina (FCGS) é um desafio para o veterinário, uma vez que a sua etiologia e tratamentos permanecem indefinidos. O presente trabalho investigou o papel do vírus da imunodeficiência felina (FIV) na gravidade do FCGS. Biópsias da mucosa oral de 19 gatos com FCGS foram divididas em dois grupos de acordo com o status sorológico de FIV. Mais tarde, o escore de lesão clínica foi correlacionado com o grau histopatológico das lesões FCGS e o grau de imunocoloração em ambos os grupos. A maioria dos animais apresentou alterações histológicas significativas, porém não foi observada correlação com a intensidade de imunocoloração para FIV. Concluiu-se que a presença de infecção por FIV ou o estado soropositivo dos animais não parece interferir com a gravidade dos sinais clínicos nem com o grau de alterações histopatológicas quando comparado ao grupo soronegativo.(AU)

Molecular and serological detection of Leishmania spp. in horses from an endemic area for canine visceral leishmaniasis in southeastern Brazil / Detecção molecular e sorológica de infecção por Leishmania (Leishmania) infantum em cavalos na região Sudeste do Brasil

This study aimed to verify the occurrence of Leishmania spp. and Leishmania (Leishmania) infantum in horses from a visceral leishmaniasis endemic area in Brazil. DNA samples from blood and conjunctival swab (CS) were tested by PCR and Indirect Immunofluorescence Antibody Test (IFAT). Although none of the horses was clinically sick, animals infected by Leishmania spp. were found and some could be characterized as infected by L. (L.) infantum. From 40 horses, 100% of the animals were positive by blood PCR, 90% (36/40) by CS PCR, and 2.5% (01/40) in serodiagnosis, by IFAT. Six from these 40 horses were L. (L.) infantum positive by blood PCR. Direct sequencing and analysis of amplicons resulted in a sequence to evolutionary analysis. Results indicate the presence of Leishmania spp. and L. (L.) infantum infecting healthy horses in Brazil. The presence of Leishmania spp. and L. (L.) infantum DNA in asymptomatic horses suggests that they can be important reservoirs of these parasites, a highly relevant finding for the epidemiological surveillance of the diseases they cause.(AU)

O estudo objetivou verificar a ocorrência de Leishmania spp. e Leishmania (Leishmania) infantum em cavalos de uma região endêmica para leishmaniose visceral do Brasil. Amostras de DNA de sangue e suabe conjuntival (SC) foram testadas pela PCR e pela Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI). Embora nenhum cavalo estivesse clinicamente doente, animais infectados por Leishmania spp. e L. (L.) infantum foram encontrados em Ilha Solteira/SP. Dos 40 cavalos, 100% (40/40) foram positivos pela PCR de sangue, 90% (36/40) pela PCR de SC, e 2,5% (01/40) no sorodiagnóstico, pela RIFI. Seis desses 40 cavalos foram positivos para L. (L.) infantum pela PCR de sangue. O sequenciamento direto e a análise dos amplicons resultaram em uma sequência para análise evolutiva. Os resultados indicam a presença de Leishmania spp. e L. (L.) infantum infectando cavalos saudáveis no Brasil. A presença de DNA de Leishmania spp. and L. (L.) infantum em cavalos saudáveis sugere que eles podem ser importantes reservatórios desses parasitas, um achado altamente relevante para a vigilância epidemiológica das doenças que causam.(AU)